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極小種群野生植物滇桐組培繁殖技術(shù)規(guī)程

標(biāo)準(zhǔn)起草單位：中國(guó)科學(xué)院昆明植物研究所、云南高黎貢山國(guó)家級(jí)自然保護(hù)區(qū)瀘水管護(hù)分局

標(biāo)準(zhǔn)歸口單位：云南省林業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)

標(biāo)準(zhǔn)編號(hào)：DB53/T 1425-2025

標(biāo)準(zhǔn)發(fā)布日期：2025年6月7日

標(biāo)準(zhǔn)實(shí)施日期：2025年9月7日

標(biāo)準(zhǔn)制定背景

滇桐（Craigia yunnanensis）是古老的第三紀(jì)孑遺植物，具有較高的歷史文化價(jià)值，于1921年在中國(guó)云南被發(fā)現(xiàn)并命名，屬西南地區(qū)特有物種，列為《中國(guó)生物多樣性紅色名錄——高等植物卷》（2020版）瀕危植物，主要分布中國(guó)云南中部、東南部、西南部及貴州、西藏，石灰?guī)r季節(jié)性雨林或半常綠季雨林中，是國(guó)家重點(diǎn)保護(hù)的極小種群野生植物。滇桐樹干通直，樹形優(yōu)美，樹葉紙質(zhì)橢圓形，葉色四季分明，春夏翠綠，秋季轉(zhuǎn)為金黃色或紅褐色；7月聚傘花序2—5朵腋生，花為黃紫色；9至10月蒴果成熟，紅色，5棱形，極具觀賞性。此外，滇桐木質(zhì)輕軟、紋理細(xì)膩，可用于制作小型家具和工藝品等。滇桐適應(yīng)性強(qiáng)，能在石灰?guī)r山地惡劣的環(huán)境中生長(zhǎng)，有助于防止水土流失，維護(hù)生態(tài)環(huán)境穩(wěn)定，可作為石灰?guī)r地區(qū)重要的生態(tài)修復(fù)樹種。據(jù)調(diào)查，目前僅在云南、貴州和西藏發(fā)現(xiàn)21個(gè)分布點(diǎn)，500余株存活個(gè)體，野外種群數(shù)量稀少且呈零星間斷分布。

2013年起，起草單位開展了滇桐野外生境調(diào)查、種質(zhì)資源收集、繁育試驗(yàn)研究，經(jīng)過6年實(shí)踐探索，成功建立滇桐組織培養(yǎng)育苗技術(shù)體系，實(shí)現(xiàn)利用現(xiàn)代生物技術(shù)促進(jìn)該物種的苗木擴(kuò)繁和生產(chǎn)。

以長(zhǎng)期科學(xué)試驗(yàn)研究成果，制定滇桐組培繁殖技術(shù)規(guī)程標(biāo)準(zhǔn)，為滇桐的無性繁殖提供生產(chǎn)規(guī)范，為促進(jìn)該瀕危物種種苗的人工擴(kuò)繁提供技術(shù)支撐。

標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)容主要結(jié)構(gòu)

（一）范圍

適用于極小種群野生植物滇桐組培繁殖。

標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了滇桐組織培養(yǎng)的基本要求、外植體采集與處理、誘導(dǎo)培養(yǎng)、增殖培養(yǎng)、壯苗與生根培養(yǎng)、煉苗移栽等技術(shù)要求。

（二）組織培養(yǎng)基本要求

培養(yǎng)基配制、消毒、接種操作、接種器械清洗與消毒、接種室及培養(yǎng)室管理執(zhí)行LY/T 1882-2010標(biāo)準(zhǔn)，其中：外植體的消毒及誘導(dǎo)、增殖、生根等環(huán)節(jié)中所涉及的轉(zhuǎn)接、切分均應(yīng)于超凈工作臺(tái)進(jìn)行。

培養(yǎng)室培養(yǎng)條件：溫度23—30℃，光照強(qiáng)度1000—1500Lux，光照時(shí)間每天10小時(shí)。

（三）外植體采集與處理

外植體采集。3—5月、9—12月，從生長(zhǎng)旺盛、無病蟲害植株的當(dāng)年生枝條上采集帶芽莖段作為外植體，并記錄外植體母株、采集時(shí)間和地點(diǎn)等信息。

保存與運(yùn)輸。采集的外植體宜當(dāng)天消毒接種。若需長(zhǎng)途運(yùn)輸，控制在3天內(nèi)，75%酒精擦拭表面后，用干凈的紙巾包裹置于自封袋中，放置冰袋低溫冷藏運(yùn)輸。

外植體消毒。剪去外植體上葉片，保留葉柄0.3—0.5厘米，剪成1.0—1.5厘米帶芽的莖段，于1%的肥皂液中浸泡10分鐘后用流動(dòng)的自來水清洗干凈；用75%酒精消毒8—10秒，無菌水沖洗3次后，用10%次氯酸鈉溶液消毒5—6分鐘，再用無菌水沖洗3—5次。

（四）誘導(dǎo)培養(yǎng)

誘導(dǎo)培養(yǎng)基配方。MS 6-BA 0.1—2.0毫克/升 NAA 0.5毫克/升 蔗糖30克/升 瓊脂5克/升，pH5.8。

接種要求。將消毒外植體葉柄和莖段兩端切去0.1—0.2厘米，按照芽生長(zhǎng)方向朝上原則，豎直或者傾斜接種于誘導(dǎo)與分化培養(yǎng)基中，每個(gè)培養(yǎng)瓶接1個(gè)芽或者莖段，誘導(dǎo)腋芽和叢芽生長(zhǎng)。

（五）增殖培養(yǎng)

增殖培養(yǎng)基配方。MS 6-BA 0.5—1.0毫克/升 NAA 0.1—0.8毫克/升 蔗糖30克/升 瓊脂5克/升，pH5.8。

接種要求。腋芽和頂芽生長(zhǎng)至2—3厘米時(shí)，將其切成帶1—2個(gè)節(jié)的莖段，接種于增殖培養(yǎng)基，增殖周期50—60天。

（六）壯苗與生根培養(yǎng)

壯苗與生根培養(yǎng)基配方。MS IAA 0.5—1.0毫克/升 IBA 0.5—1.0毫克/升 蔗糖30克/升 瓊脂5克/升，pH5.8。

壯苗與生根培養(yǎng)操作。增殖培養(yǎng)的莖段生長(zhǎng)至3—4厘米時(shí)，切下生長(zhǎng)健壯、形態(tài)正常、帶頂芽、長(zhǎng)2—3厘米的莖段進(jìn)行壯苗與生根培養(yǎng)。

（七）煉苗移栽

組培瓶苗的質(zhì)量要求。植株生長(zhǎng)健壯、葉形葉色正常，具3—4片展開葉；株高3—5厘米；根數(shù)量多于3條，根長(zhǎng)1—2厘米。

閉瓶煉苗。將組培瓶苗移植于遮光率60%—70%、空氣濕度＜50%的大棚內(nèi)，閉瓶煉苗7—10天，使組培苗適應(yīng)自然光照和晝夜溫差。

移栽。基質(zhì)按珍珠巖：腐殖土：生紅土1:2:3體積比配制，用多菌靈800倍液噴施基質(zhì)并與土混拌均勻，pH5.8—6.8，覆蓋塑料膜密封消毒7天。準(zhǔn)備規(guī)格為6厘米×7厘米栽培容器，將煉苗后的瓶苗取出，洗凈根部培養(yǎng)基，及時(shí)栽入容器中，澆透定根水。移栽到大棚后30天內(nèi)，溫度20℃—30℃，遮光率70%—80%，空氣濕度70%—80%，基質(zhì)含水量40%—50%；移栽30天后，逐步增加光照強(qiáng)度，每7天噴施70%甲基托布津可濕性粉劑800倍液1次和全營(yíng)養(yǎng)素葉面肥500倍液1次，連續(xù)噴施4—5次。

出圃要求。移栽培育1年，苗高≥20厘米，地徑≥0.2厘米。

標(biāo)準(zhǔn)實(shí)施意義

標(biāo)準(zhǔn)的發(fā)布實(shí)施，為滇桐種苗繁育生產(chǎn)提供了技術(shù)規(guī)范，對(duì)保護(hù)滇桐瀕危物種，促進(jìn)滇桐種質(zhì)資源保存、遷地保護(hù)、種群恢復(fù)及利用，維護(hù)生物多樣性具有重要意義。

來源：云南省林業(yè)和草原局

作者：云南省林業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)   中國(guó)科學(xué)院昆明植物研究所